Page 83 - Công Nghệ Sinh Học Cho Nông Dân Quyển 7

Bước 2 (khử trùng mẫu nuôi cấy mô): nguyên liệu khử
trùng cho cẩm chướng là HgCL2 0,1% trong 10 phút hoặc

CaCL2 5-7% trong 1 5 - 2 0 phút. Sau khi xử lý chất khử
trùng 3 - 5 lần, cắt nhỏ theo kích thước thích hợp rồi cây
trên môi trường tái sinh chồi.
Bước 3 (tái sinh chồi): tiến hành trong phòng thí
nghiệm. Mục đích là tái sinh định hướng các mô nuôi

cấy. Tùy từng giai đoạn nhân giống mà bổ sung vào môi
trường MS theo nồng độ và tỷ lệ khác nhau (dao động từ
1-2 ppm đối với Cytokinin và 0,5 - 1,0 đối với auxin).
Bước 4 (nhân nhanh cụm chồi): cụm chồi sau khi được
tái sinh từ giai đoạn tái sinh chồi tiếp tục được cấy nhân
trong môi trường có bổ sung chất điều tiết sinh trưởng (sử
dụng GA3 100 - 200ppm) qua đó kích thích khả năng
phát sinh chồi bất định cụm chồi.

Bước 5 (tạo cây hoàn chỉnh): tiến hành trong phòng thí
nghiệm. Để tạo cây hoàn chỉnh cần cấy chuyển các chồi
đơn lẻ hoặc các đoạn cắt vào môi trường ra rễ đó là than
hoạt tính (0,3 — 0,5g/l) và NAA ở nồng độ thấp 5 - 1 0
ppm. Thường sau 2 tuần nuôi cấy trên môi trường tạo rễ,
mỗi chồi sẽ có từ 4 - 6 rễ và chiều dài rễ từ 2 - 3cm. Lúc
này cây đạt tiêu chuẩn đưa ra vườn ươm.

Bước 6 (đưa cây ra vườn ươm): Tiến hành trong nhà
lưới. Là giai đoạn đưa cây hoàn chỉnh từ trong phòng

82